一、服務概述
        穩轉細胞系是指在細胞中持續穩定表達特定基因或沉默特定基因表達。構建穩轉細胞系的(de)基本原理(lǐ)是用(yòng)轉染質粒或病毒感染的(de)方法将構建好的(de)含外源DNA的(de)載體導入細胞，根據不同的(de)基因載體中所含的(de)抗性标志選用(yòng)相應的(de)藥物(wù)進行選擇性篩選，得(de)到可(kě)穩定表達目的(de)蛋白，或者穩定沉默特定基因表達的(de)細胞系。常用(yòng)的(de)真核表達載體的(de)抗性标志物(wù)有嘌呤黴素（puromycin）、潮黴素（hygromycin）和(hé)新黴素（neomycin）。
        目的(de)蛋白的(de)過表達或沉默往往是硏究該基因/蛋白功能的(de)常規手段。在基因功能的(de)研究中，基因是否有效轉染靶細胞，是功能研究的(de)前提條件之一。而穩定表達細胞系則彌補了(le)瞬時(shí)感染（或轉染）中外源基因表達時(shí)間短的(de)缺陷，便于長(cháng)期觀察基因對(duì)于細胞功能的(de)影(yǐng)響以及蛋白間相互作用(yòng)。
        此外，目的(de)蛋白如重組抗體、細胞因子等的(de)過表達細胞系可(kě)用(yòng)于該目的(de)蛋白的(de)大(dà)量生産。
        默賽爾生物(wù)有著(zhe)多(duō)年構建穩轉細胞株的(de)經驗，已在多(duō)個(gè)種屬細胞中成功構建過表達和(hé)RNAi穩轉細胞株。 

二、服務内容
1. 基因過表達、沉默等科研用(yòng)穩定細胞系的(de)構建；
2. 重組抗體、細胞因子等生産蛋白用(yòng)穩定細胞系的(de)構建。

三、服務優勢
1. 擁有成熟的(de)穩轉細胞系篩選平台，技術多(duō)樣化(huà)，并且可(kě)以結合客戶特殊需求，靈活地定制服務。
2. 對(duì)外源基因表達進行嚴格鑒定，有多(duō)種檢測方法：q-PCR，RT-PCR，Western blot，immunofluorescence，ELISA，FACS。
3. 質量保證：穩轉細胞系無細菌、真菌及支原體污染，其生長(cháng)狀态、活率及目的(de)蛋白表達水(shuǐ)平可(kě)長(cháng)期保持穩定。

四、服務示例（以PSK2基因過表達CHO穩轉細胞系爲例）
（1）PSK2基因慢(màn)病毒表達質粒構建

 

圖1 PSK2基因慢(màn)病毒表達質粒pLVX-CMV-GFP-PSK2構建

圖2 pLVX-CMV-GFP-PSK2質粒酶切鑒定圖

（2）多(duō)克隆穩定細胞株篩選及鑒定

 

圖3 G418篩選的(de)GFP-PSK2穩定表達的(de)多(duō)克隆CHO細胞系

 

圖4 野生型CHO細胞（WT-CHO）與GFP-PSK2穩定表達的(de)多(duō)克隆CHO細胞中PSK2蛋白表達的(de)WB檢測圖

（3）單克隆穩定細胞株篩選及鑒定

圖5 G418篩選的(de)GFP-PSK2穩定表達的(de)單克隆CHO細胞系

 

圖6 野生型CHO細胞（WT-CHO）與GFP-PSK2穩定表達的(de)單克隆CHO細胞中PSK2蛋白表達的(de)WB檢測圖
 

五、服務價格及周期

服務編号	服務項目	價格	服務周期
RS004-1	目的(de)基因過表達慢(màn)病毒表達質粒構建		1-2周
RS004-2	目的(de)基因沉默的(de)shRNA慢(màn)病毒質粒構建		1-2周
RS004-3	目的(de)基因過表達慢(màn)病毒制備		3-4周
RS004-4	目的(de)基因沉默的(de)shRNA慢(màn)病毒制備		3-4周
RS004-5	宿主細胞抗生素篩選濃度确認		1-2周
RS004-6	多(duō)克隆穩定細胞株篩選及鑒定		5-6周
RS004-7	單克隆穩定細胞株篩選及鑒定		7-8周

 
六、技術服務流程
1. 用(yòng)戶下(xià)載并填寫穩轉細胞系構建技術服務協議(yì)書(shū)，發送至service@morecell.com.cn。
2. 雙方确認并簽訂技術服務協議(yì)書(shū)，按照(zhào)協議(yì)内容進行技術服務。

七、客戶須知
1. 客戶提供需過表達或沉默的(de)基因/蛋白相關信息；
2. 客戶提供需穩轉的(de)宿主細胞系。

八、交付結果
1. 含目的(de)基因序列或基因沉默shRNA序列的(de)慢(màn)病毒表達質粒(4ug)和(hé)相應的(de)慢(màn)病毒(1mL)；
2. 多(duō)克隆穩定細胞系或單克隆穩定細胞系（幹冰運輸或活細胞培養）；
3. 完整的(de)實驗報告。