一、服務概述
        慢(màn)病毒（Lentivirus）是以HIV-1（人(rén)類免疫缺陷I型病毒）爲基礎發展起來(lái)的(de)基因治療載體，可(kě)以将外源基因或外源的(de)shRNA有效地整合到宿主染色體上，從而達到良好的(de)基因治療效果。區(qū)别于一般的(de)逆轉錄病毒，它對(duì)分(fēn)裂細胞和(hé)非分(fēn)裂細胞均具有感染能力，因此它可(kě)以有效地感染包括神經元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、内皮細胞、幹細胞等在内的(de)幾乎所有的(de)哺乳動物(wù)細胞，并且感染效率非常高(gāo)，是傳統質粒轉染方法的(de)數倍甚至數十倍，能夠比較方便快(kuài)捷地實現目的(de)基因或目的(de)shRNA的(de)長(cháng)期、穩定表達，是目前較受歡迎的(de)基因治療和(hé)基因修飾細胞治療研究工具，在體外實驗及體内實驗的(de)研究中，慢(màn)病毒正在獲得(de)越來(lái)越廣泛的(de)應用(yòng)。
        默賽爾生物(wù)采用(yòng)第3代重組慢(màn)病毒包裝系統制備病毒顆粒，該套包裝系統具有較高(gāo)的(de)感染性和(hé)安全性能，病毒制備所必需的(de)元件序列被拆分(fēn)到4個(gè)質粒當中，分(fēn)别是：1）1個(gè)編碼目的(de)基因的(de)慢(màn)病毒表達質粒；2）2個(gè)包裝質粒（pLP1、pLP2）。其中一個(gè)質粒編碼Gag和(hé)Pol, 另外一個(gè)質粒編碼Rev；3）1個(gè)編碼包膜蛋白的(de)質粒（pLP/VSVG）。将上述質粒共同轉染到293T細胞中，即可(kě)生産出攜帶目的(de)基因的(de)重組慢(màn)病毒顆粒，也(yě)稱爲自我失活VSV-G假型慢(màn)病毒，在保證對(duì)目的(de)細胞的(de)高(gāo)感染能力的(de)同時(shí)，也(yě)具有更好的(de)安全性。

圖1 第三代慢(màn)病毒包裝輔助質粒示意圖

圖2 第三代慢(màn)病毒結構示意圖


二、服務内容
1. 構建慢(màn)病毒載體，使用(yòng)第三代慢(màn)病毒包裝轉染293T細胞。
2. 基因過表達慢(màn)病毒的(de)制備；
3. 基因沉默shRNA慢(màn)病毒的(de)制備。
4. 病毒純化(huà)，并進行滴度确認。

三、服務優勢
1. 采用(yòng)第三代四質粒包裝系統，具有更高(gāo)的(de)安全性；
2. 獲得(de)的(de)慢(màn)病毒滴度高(gāo)，經過濃縮後可(kě)提獲得(de)滴度≥108TU/mL的(de)慢(màn)病毒溶液；
3. 可(kě)選擇是否帶有熒光(guāng)報告基因（GFP、Cherry等）和(hé)藥篩标記基因（Puro、Neo等）；
4. 慢(màn)病毒的(de)生産在cGMP實驗室中進行，遵循嚴格的(de)質量控制标準，确保生産的(de)慢(màn)病毒正确可(kě)靠。

四、服務示例（以攜帶PSK2基因的(de)重組慢(màn)病毒制備爲例）
（1）PSK2基因慢(màn)病毒表達質粒構建

圖3 pLVX-CMV-GFP-PSK2質粒酶切鑒定圖

（2）GFP-PSK2慢(màn)病毒的(de)檢測

圖4 不同稀釋倍數的(de)GFP-PSK2慢(màn)病毒感染293T細胞48小時(shí)後的(de)顯微拍(pāi)攝圖

圖5 不同稀釋倍數的(de)GFP-PSK2慢(màn)病毒感染293T細胞48小時(shí)後細胞中PSK2基因表達的(de)實時(shí)定量 PCR 曲線圖

（4）shRNA慢(màn)病毒基因沉默效果的(de)檢測

圖6 兩種shRNA慢(màn)病毒感染5637細胞48小時(shí)後細胞中FRS2基因表達western結果
 

五、服務價格及周期

服務編号服務項目提供規格價格服務周期
RS001-1目的(de)基因過表達慢(màn)病毒表達質粒構建≥500ng/μL, 100μL
1-2周
RS001-2目的(de)基因沉默的(de)shRNA慢(màn)病毒質粒構建≥500ng/μL, 100μL
1-2周
RS001-3目的(de)基因過表達慢(màn)病毒制備≥108TU/mL, 1mL
3-4周
RS001-4目的(de)基因沉默的(de)shRNA慢(màn)病毒制備≥108TU/mL, 1mL
3-4周

 

六、技術服務流程
1. 用(yòng)戶下(xià)載并填寫慢(màn)病毒包裝技術服務協議(yì)書(shū)，發送至service@morecell.com.cn。
2. 雙方确認并簽訂技術服務協議(yì)書(shū)，按照(zhào)協議(yì)内容進行技術服務。

七、客戶須知
1. 如客戶所需包裝的(de)目的(de)基因由客戶提供，客戶提供需過表達或沉默的(de)基因/蛋白相關信息（包括基因名稱、NCBI編号、CDS區(qū)序列、目的(de)基因所在載體圖譜、酶切位點、測序結果等等）；
2. 客戶應對(duì)所提供的(de)材料及信息負責，如因客戶提供的(de)材料及信息不準确而引起的(de)實驗延誤或經濟損失由客戶承擔。

八、交付結果
1. 含目的(de)基因序列或基因沉默shRNA序列的(de)慢(màn)病毒表達質粒（≥500ng/μL，100μL）
2. 含目的(de)基因序列或基因沉默shRNA序列的(de)慢(màn)病毒溶液（≥108TU/mL，1mL）；
3. 陰性對(duì)照(zhào)慢(màn)病毒溶液（≥108TU/mL，1mL）
4. 完整的(de)實驗報告。